鼠疫菌caf1基因特异性片段的克隆表达及其抗原与抗体反应

中国媒介生物学及控制杂志 ›› 2012, Vol. 23 ›› Issue (6): 489-491,495.

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鼠疫菌caf1基因特异性片段的克隆表达及其抗原与抗体反应

杜春红¹, 王鹏^1,2, Tiffany C Ho¹, 张建中², 宋志忠¹, 董兴齐¹

1. 云南省地方病防治所, 云南省鼠疫防控技术重点实验室, 云南大理 671000;
2. 中国疾病预防控制中心传染病预防控制所, 传染病预防控制国家重点实验室, 北京 102206

收稿日期:2012-06-29 出版日期:2012-12-20 发布日期:2012-12-20
通讯作者: 董兴齐,Email:DongXQ99@vip.sina.com
基金资助:
云南省鼠疫防控技术应用基础研究省创新团队项目(2009CI010)

Clone expression and antigen-antibody reaction of two specific fragments of F1 antigen in Yersinia pestis

DU Chun-hong¹, WANG Peng^1,2, Tiffany C Ho¹, ZHANG Jian-zhong², SONG Zhi-zhong¹, DONG Xing-qi¹

1. Provincial Key Laboratory for Plague Control and Prevention, Yunnan Institute for Endemic Diseases Control and Prevention, Dali 671000, Yunnan Province, China;
2. State Key Laboratoey for Infectious Diseases Prevention and Control, National Institute for Communicable Disease Control and Prevention, Chinese Center for Disease Control and Prevention, Beijing 102206, China

Received:2012-06-29 Online:2012-12-20 Published:2012-12-20
Supported by:
Supported by the Program for Yunnan Provincal Innovation Team of Plague Prevention and Control Technology (No. 2009CI010)

摘要/Abstract

摘要： 目的克隆表达鼠疫菌caf1基因上的特异性片段并检测。方法分别选取F1上C端(caf1-C)及N端(caf1-N)两段 B细胞表位进行克隆表达;PCR扩增目的基因, 并与表达质粒pET32a(＋)进行连接, 重组质粒转化大肠埃希菌BL21(DE3) 并诱导表达;表达产物经Ni-NTA亲和层析柱纯化, 并以Western-blot法检测其抗原与抗体反应。结果分别诱导表达出大小为26 000 的Caf1-C和25 000的Caf1-N两个片段, 2个重组蛋白均以可溶形式存在, 并与鼠疫免疫血清有良好的反应。结论克隆表达出具有抗原与抗体反应的鼠疫菌F1抗原上的两段B细胞表位, 为鉴定是否是F1位点交叉奠定了基础。

关键词: 鼠疫, F1抗原, 特异性片段, 克隆表达

Abstract: Objective To express two specific fragments of F1 antigen (caf1-C) in Yersinia pestis and measure their immunological activity (antigen-antibody reaction). Methods The C-terminal (caf1-C) and N-terminal (caf1-N) of Caf1 (B cell epitopes) were chosen for expression. The target genes were amplified by PCR and linked to plasmid pET32a (+). The recombinant plasmid was then used to transform Escherichia coli BL21 (DE3), and the target gene expression was induced. The expression products were purified by HIS affinity chromatography, and their immunological activity (antigen-antibody reaction) was measured by Western- blot. Results The two fragments of Caf1-C (26 000) and Caf1-N (25 000) were obtained. The two recombinant proteins were in the soluble form and reacted well with antiplague serum. Conclusion The two B cell epitopes (Caf1-C and Caf1-N) of caf1 in Y. pestis were successfully expressed, laying a foundation for the identification of cross reaction with Caf1.

Key words: Yersinia pestis, F1 antigen, Specific fragment, Clone expression

中图分类号:

R378.6⁺1

杜春红, 王鹏, Tiffany C Ho, 张建中, 宋志忠, 董兴齐. 鼠疫菌caf1基因特异性片段的克隆表达及其抗原与抗体反应[J]. 中国媒介生物学及控制杂志, 2012, 23(6): 489-491,495.

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鼠疫菌caf1基因特异性片段的克隆表达及其抗原与抗体反应

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