小型兽类（小兽）与人类生活紧密，其体型较小、繁殖能力强、种类繁多、生活习性多样，在我国分布广泛，可传播鼠疫、肾综合征出血热（hemorrhagic fever with renal syndrome，HFRS）、钩端螺旋体病、莱姆病等多种传染病，给人类健康造成巨大威胁[1]。为研究浙江省临海市鼠源疾病病原体的状况，共选取4个街道（镇）开展鼠密度监测，并检测汉坦病毒（Hantavirus）、大别班达病毒（Dabie bandavirus）、钩端螺旋体（Leptospira，钩体）、斑疹伤寒立克次体[Rickettsia typhi，又称莫氏立克次体（R. mooseri）]和恙虫病东方体（Orientia tsutsugamushi）等5种鼠传病原体，为本市鼠源疾病防控工作提供科学依据。
1 材料与方法
1.1 监测时间及监测点设置
2022－2024年随机选择临海市5个街道中的2个街道（古城街道、大洋街道）、14个镇中的2个镇（白水洋镇、永丰镇）作为监测点，在监测点内的居民区、灌丛、重点行业等小兽活动频繁的人居生境捕捉小兽。
1.2 监测方法
采用笼夜法，以油条为诱饵，在各类建筑物等沿墙基布放，室外灌木以直线或自然地形布放，间隔5 m布放1只鼠笼，傍晚放置，次日清晨回收。将捕获的小兽首先进行形态学鉴定，然后无菌解剖采集脏器组织标本，包括肝、肾、脾、肺等，保存在-70 ℃超低温冰箱中待检。
1.3 病原体检测方法
剪取同一只小兽的肝、肾、脾、肺等4种组织标本共20~30 mg，混合后用冷冻研磨仪研磨匀浆，采用核酸快速提取试剂盒（磁珠法）[天根生化科技（北京）有限公司]，按照说明书提取核酸。选用汉滩病毒和汉城病毒核酸检测试剂盒（货号：YJB60201N，批号：20220203、T202302004、T202403003）、钩端螺旋体核酸检测试剂盒（荧光PCR法）（货号：YJB30101N，批号：20220203、T202305004、T202403003）、大别班达病毒核酸检测试剂盒（荧光PCR法）（货号：YJBC70107N，批号：20220203、T202305003、T202403002）、恙虫病东方体核酸检测试剂盒（PCR荧光探针法）（货号：YJB10145，批号/20230203、T202305002、T202403003）及莫氏立克次体核酸检测试剂盒（PCR荧光探针法）（货号：YJB60121N，批号：20220203、T202305004、T202403003）（江苏硕世生物科技股份有限公司），采用荧光定量PCR方法，根据试剂盒说明书，对标本开展汉坦病毒、大别班达病毒、钩体、斑疹伤寒立克次体和恙虫病东方体检测。反应总体积为25 μl，其中待测样本核酸5 μl，同时设置阳性对照和空白对照。
1.3.1 汉滩病毒、汉城病毒、大别班达病毒核酸检测
汉滩病毒、汉城病毒和大别班达病毒核酸检测反应参数：50 ℃ 10 min；95 ℃ 5 min；95 ℃ 10 s，58 ℃ 30 s，45个循环。结果判读：循环阈值（cycle threshold，Ct）≤37，扩增曲线呈“S”型且有明显指数增长期，判为阳性；Ct > 40或未检出，判为阴性；37 < Ct≤40时，对样本进行重复检测，如复测结果仍37 < Ct≤40，曲线呈“S”型且有明显指数增长期，则判为阳性，否则判为阴性。
1.3.2 钩体、恙虫病东方体、斑疹伤寒立克次体核酸检测
钩体、恙虫病东方体、斑诊伤寒立克次体核酸检测反应参数：95 ℃ 5 min；95 ℃ 10 s，58 ℃ 30 s，40个循环。结果判读：Ct≤35，扩增曲线呈“S”型且有明显指数增长期，判为阳性；Ct > 38或未检出判为阴性；35 < Ct≤38时，对样本进行重复检测，如复读结果仍35 < Ct≤38，曲线呈“S”型且有明显指数增长期，则判为阳性，否则判为阴性。
1.4 统计学方法
采用Excel 2010软件录入数据，SPSS 27.0软件进行统计分析，本研究的数据为无序分类资料，病原体检出数量以阳性数和阳性率表示，率的比较采用χ2检验或Fisher确切概率法（或Freeman-Halton精确检验），P < 0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 小兽的种群和分布
本次调查共回收有效鼠笼4 928个，捕获小兽共317只，总捕获率为6.43%。捕获小兽中最多的为褐家鼠（Rattus norvegicus）187只（58.99%），其次为北社鼠（Niviventer confucianus）32只（10.09%）、黑线姬鼠（Apodemus agrarius）25只（7.89%），鼩鼱（Soricidae）20只（6.31%）、黄胸鼠（R. tanezumi）17只（5.36%），小泡巨鼠（Leopoldamys edwardsi）、黄毛鼠（R. losea）、海南社鼠（N. lotipes）、青毛巨鼠（Berylmys bowersi）的构成比均 < 5.00%。城镇居民区、农村居民区、灌丛和重点行业等4类生境分别捕获小兽10（3.15%）、46（14.51%）、139（43.85%）和122只（38.49%）。不同生境的小兽构成差别较大，城镇居民区的10只小兽中，有7只为褐家鼠；农村居民区也以褐家鼠（44/46，95.65%）为主；灌丛以褐家鼠（35/139，25.18%）、北社鼠（32/139，23.02%）和黑线姬鼠（25/139，17.99%）为多；重点行业以褐家鼠（101/122，82.79%）为主，其次为黄胸鼠（10/122，8.20%）。见表 1。
表1 2022－2024年浙江省临海市人居环境捕获的小型兽类种群及分布Tab. 1 Species and distribution of small mammals captured in human settlements of Linhai, Zhejiang Province, 2022-2024 |
| 生境 | 褐家鼠 | 北社鼠 | 黑线姬鼠 | 鼩鼱 | 黄胸鼠 | 小泡巨鼠 | 黄毛鼠 | 海南社鼠 | 青毛巨鼠 | 总计 | |||||||||||||||||||
| 数量（只） | 构成比（%） | 数量（只） | 构成比（%） | 数量（只） | 构成比（%） | 数量（只） | 构成比（%） | 数量（只） | 构成比（%） | 数量（只） | 构成比（%） | 数量（只） | 构成比（%） | 数量（只） | 构成比（%） | 数量（只） | 构成比（%） | 数量（只） | 构成比（%） | ||||||||||
| 城镇居民区 | 7 | 2.21 | 0 | 0.00 | 0 | 0.00 | 0 | 0.00 | 2 | 0.63 | 0 | 0.00 | 1 | 0.32 | 0 | 0.00 | 0 | 0.00 | 10 | 3.15 | |||||||||
| 农村居民区 | 44 | 13.88 | 0 | 0.00 | 0 | 0.00 | 0 | 0.00 | 1 | 0.32 | 0 | 0.00 | 1 | 0.32 | 0 | 0.00 | 0 | 0.00 | 46 | 14.51 | |||||||||
| 灌丛 | 35 | 11.04 | 32 | 10.09 | 25 | 7.89 | 13 | 4.10 | 4 | 1.26 | 15 | 4.73 | 7 | 2.21 | 6 | 1.89 | 2 | 0.63 | 139 | 43.85 | |||||||||
| 重点行业 | 101 | 31.86 | 0 | 0.00 | 0 | 0.00 | 7 | 2.21 | 10 | 3.15 | 0 | 0.00 | 4 | 1.26 | 0 | 0.00 | 0 | 0.00 | 122 | 38.49 | |||||||||
| 合计 | 187 | 58.99 | 32 | 10.09 | 25 | 7.89 | 20 | 6.31 | 17 | 5.36 | 15 | 4.73 | 13 | 4.11 | 6 | 1.89 | 2 | 0.63 | 317 | 100.00 | |||||||||
2.2 不同镇（街道）的鼠传病原体检测情况
4个监测镇（街道）共采集小兽的肝、脾、肺、肾等内脏样本317份，其中34份病原体阳性，总阳性检出率为10.73%。古城街道、大洋街道、白水洋镇、永丰镇的样本病原体检出率分别为13.04%（15/115）、5.68%（5/88）、6.00%（3/50）、17.19%（11/64），各镇（街道）病原体检出率差异无统计学意义（χ2=6.940，P=0.072）。钩体和汉坦病毒的检出率分别为10.41%（33/317）和0.95%（3/317），大别班达病毒、恙虫病东方体、斑疹伤寒立克次体均未检出，钩体和汉坦病毒的检出率差异有统计学意义（χ2=26.505，P < 0.001）。古城街道、大洋街道分别有1只褐家鼠组织标本中同时检出钩体和汉坦病毒，混合感染率为0.63%（2/317）。
2.3 不同种类小兽病原体带毒率
钩体阳性检出率在褐家鼠中为8.56%（16/187）、黑线姬鼠中为48.00%（12/25）、黄毛鼠中为7.69%（1/13）、黄胸鼠中为5.88（1/17）、北社鼠中为6.25%（2/32），不同种类小兽钩体阳性率差异有统计学意义（P < 0.001），黑线姬鼠阳性检出率最高。在3份褐家鼠组织标本中检测到汉坦病毒，阳性率为1.60%（3/187）。小泡巨鼠、鼩鼱、青毛巨鼠等均未检到上述5种鼠传病原体。
3 讨论
有研究显示，台州市农村地区优势鼠种为黑线姬鼠，其汉坦病毒携带率达到1.19%[8]。本次研究结果显示，临海市黑线姬鼠的钩体阳性检出率高达48.00%，显示城乡人居环境人群感染钩体的风险极大，因此对重点的人居环境开展防鼠灭鼠防制工作，降低鼠密度，对预防钩体病具有重要公共卫生意义。
